Vincent Paul Kartheiser è figlio di Janet Marie Gruye e James Ralph Kartheiser. Ha quattro sorelle (Andrea, Colette, Elise and Theresa) e un fratello, Nathan. Una delle sue attrici favorite è Monica Keena, con la quale ha realizzato due film: Delitto + castigo a Suburbia e College femminile. Kartheiser ha fatto il suo debutto sullo schermo con un piccolo ruolo nel film del 1993 Qualcuno da amare, con Marisa Tomei e Christian Slater. Kartheiser poi si è trovato scritturato in molte produzioni per le famiglie; molto notevole il film drammatico di azione e avventura Alaska, nel quale ha recitato con Thora Birch e Charlton Heston. Il film ha condotto Kartheiser a ottenere il ruolo principale in Masterminds - La guerra dei geni, dove recitava accanto a Patrick Stewart. Il ruolo successivo avuto da Kartheiser nel film Un altro giorno in paradiso ha stabilito il suo rango e la sua capacità a interpretare ruoli complessi. Il film ha fruttato a Kartheiser prestigio e notorietà negli ambienti cinematografici, così è stato chiamato per il film College femminile, e successivamente ha recitato nel film Delitto + castigo a Suburbia, presentato al Sundance Film Festival nel 2000. Successivamente Kartheiser ha ottenuto un ruolo regolare nella popolare serie televisiva Angel, dove ha interpretato Connor, il figlio di due vampiri. Ritornando poi alla realizzazione di film, Kartheiser ha preso parte al film Dandelion, che è stato mostrato al Sundance Film Festival del 2004. Kartheiser ha avuto anche un ruolo nella serie televisiva Mad Men nel 2007.
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